İmmünohistokimya, bir hücre veya dokuda belirli bir antijen (protein) veya hücre arama tekniğidir. Teknik iki farklı adımı içerir: 1) slayt hazırlama (fiksasyon ve doku hazırlama gibi) ve reaksiyonla ilgili adımlar (antijen geri kazanımı ve antikor tedavileri) ve 2) yorumlama ve analiz.
İmmünohistokimya yönteminde antijenler dokularda arandı; Antikorun uygulanması ve antikorun antijene spesifik bağlanması ile tanımlanabilir. Toplamda, antijenlerin antikorlarla tanımlanması ve görüntüleme gibi birçok adımı içerir. Aynı işlemler hücrelere uygulandığında, tekniğe immünositokimya denir.
Araştırma veya patoloji laboratuvarlarında çeşitli durumlarda immünohistokimyasal reaksiyonlar uygulanmaktadır. En önemli uygulamalar şunlardır: 1) kanser hücrelerinin histolojik teşhisi, 2) tümör alt tiplerinin tanımlanması (örneğin, lenfoma) 3) ilk metastaz bölgesinin karakterizasyonu, 4) spesifik hastalıklar için terapötik belirteçlerin ve prediktif faktörlerin araştırılması, 5) iyi huylu ve kötü huylu neoplazmalar. kötü huylu tümörleri ayırt etmek, 6) Hücrenin salgıladığı yapı ve maddeleri anlamak. Olguların %95’inde immünohistokimyanın yararlı bir tamamlayıcı tanı yöntemi olduğu, terapötik ve cerrahi yöntemlerin düşük maliyet ve yüksek kârla çalışmasına katkı sağladığı gözlemlenmiştir.
yöntemi uygularken; Numunenin laboratuvara getirilmesi, numunenin sabitlenmesi ve antikorların uygulanması kritik adımlardır. Uzun süre fiksasyonda bırakılan taze örnekler, antijen özgüllüğünü kaybedebilir. Yapılan bir çalışmada; 12 haftalık depolama sonrasında meme kanseri doku kısmının antijen özelliğini kaybettiği gözlemlendi. Bununla birlikte, aynı şey, 10 yıldan uzun bir süredir parafine gömülmüş durumda saklanan doku parçaları için geçerli değildir. Örneğin; Formaldehit fiksasyonu ve parafine gömme dünya çapında en yaygın kullanılan doku yöntemleridir. Bununla birlikte, formaldehit kullanımı antikor bağlanmasının başarısız olmasına neden olabileceğinden başka fiksatifler kullanılmıştır. Bu nedenle alkol ve aseton gibi alkol içeren maddeler de kullanılmıştır.
teknik uygulama
Dokuları işlerken yüksek sıcaklıkta (genellikle 60 derecenin üzerinde) parafinle kaplanır. Bir diğer önemli adım ise slaytların hazırlanmasıdır. Numuneyi içeren parafinler, 3 ila 7 um kalınlığında şeritler halinde kesilir. Silan veya polilizin gibi bağlayıcılarla hazırlanan lamlara yerleştirilir. 3 μm’den daha ince parçalar zayıf etkileşime girer ve 7 μm’den daha kalın parçalar dokunun bir kısmının görünmemesine neden olabilir.
Antikorlar numuneye bağlandıktan sonra, mikroskop altında görüntüler elde etmek için bir avidin-biotin peroksidaz kompleksi (ABC) ve bir streptavidin-biotin kompleksi (LSAB) kullanılır.
Bu yöntemde iki tip antikor kullanılmaktadır. bunlar; Birincil ve ikincil antikorlar. Birincil çapalar monoklonal ve poliklonal olarak ayrılır. Poliklonal antikorlar, bir antijen üzerinde birden fazla bölgeyi tanıyabilir ve aşılanmış hayvanlardan türetilir. Monoklonal antikorlar ise antijende tek bir bölgeyi tanıyarak daha spesifik sonuçlar verir.
İmmünohistokimyada güvenilir sonuçların ortaya çıkması için önemli olan nokta; Hassas ve spesifik birincil antikorların kullanımı için. Antikorun ilgilenilen proteini tanıma yeteneği, görüntü kalitesini artırır. Birkaç şirket ve akademik laboratuvar, proteine özgü birincil antikorlar sağlar. Uygun birincil antikorun seçimi, literatür araştırması veya deney yoluyla yapılır. Ek olarak, uygun sekonder antikorun seçimi, görüntüleme ve analiz için kritik öneme sahiptir. İkincil antikorlar, birincil antikorlara bağlanır ve ayrıca floroforlara da bağlanır. Buradaki floroforlar, görüntülemeyi sağlayan floresan partiküllerdir. Bu sayede sekonder antikorlar görüntüye radyasyon sağlar ve görüntü mikroskop tarafından yakalanır. İki farklı florofor tipinden gelen sinyal çakışırsa, yanlış bir görüntü elde edilir. Müdahale etmeyen ikincil antikorların kullanılabilmesi için kontroller önemlidir. Bu kontroller, bir dizi birincil ve ikincil antikor ile etiketlendi.
Negatif kontroller ve pozitif kontroller de kullanılır ve yanlış antikor bağlanması nedeniyle sonucun yanlış olup olmadığını belirlemek için numuneyle karşılaştırılır.
Mikroskop altındaki görüntüye göre immünohistokimyanın yorumlanması genellikle niteliksel ve göreceli bir durumdur. Kalitatif analiz, belirli bir molekülün hücresel yokluğunun veya varlığının açıklanması gerektiğinde kullanılır. Bununla birlikte, immünohistokimya patoloji laboratuvarlarında rutin bir teknik haline geldikten sonra, protein alımını kantitatif olarak belirlemek için bir girişimde bulunuldu. Kantitatif analiz yöntemleri son yıllarda gelişmiştir. Bunun için radyoaktif hücrelerin yüzdesinin hesaplandığı bilgisayar tabanlı yöntemler kullanılır. Daha yaygın olarak, araştırmacılar protein miktarını hesaplamak için ELISA yöntemlerini ve Western blot yöntemini kullanırlar. İmmünohistokimyanın en büyük faydası, özellikle patoloji laboratuvarlarında kanser hücrelerinin ve diğer hücre alt tiplerinin teşhisi ve tanımlanmasıdır.
kaynak:
1) Luango de Matos ve ark. Biyobelirteç tespiti ve klinik uygulamada önemli bir araç olarak immünohistokimya. Biyobelirteç İçgörüleri 2010: 5
2) Glenn V McAllister. İmmünohistokimya ve kültürlenmiş nöronlarda protein boyama miktarının belirlenmesi. Doğa Protokolü 2006.
yazar: Ayka Olkay
Diğer gönderilerimize göz at
[wpcin-random-posts]