Kromatografi, kan veya hücrelerdeki maddeleri veya tek bir maddenin bileşenlerini ayırmak için en iyi tekniklerden biridir. İlk kez kromatografik ayırma ile bakterilerin 1000’den fazla farklı sayıda proteine sahip olduğu gösterildi ve bu proteinlerin çoğu kromatografi ile izole edildi. Kromatografi kullanılarak tek bir protein izole edildikten sonra, onu hidrolize edebilir ve ardından amino asitleri birbirinden ayırmak için tekrar kromatografi kullanabiliriz.
Birçok kromatografi varyantı aynı temel mekanizmayı paylaşır. Bu mekanizma, çalışılan karışımın, birbiriyle karışmayan iki çözücü ve bir katı yüzey aktif madde gibi iki farklı malzemeye aynı anda maruz bırakılmasıdır. Yüzeyine yapışan maddelere (parçacıklar, erimiş katı veya sıvı) adsorbanlar denir. Karışımdaki her çözünenin her bir molekülü, iki madde arasında ileri geri yayılır ve çözünen molekülün bu iki çözücüye olan nispi afinitesi, her birinde ortalama olarak ne kadar kalacağını belirler. Örneğin suda yüksek oranda, fenolde az çözünen A Maddesi (karışmayan) su ve fenol ile bir kavanozda durulanırsa, A’nın her bir molekülü bu iki çözelti arasında zamanını paylaşacak ve suda daha uzun süre kalacaktır. .
İçindekiler
kromatografi kağıdı
Kağıt kromatografisi, kromatografi varyantlarının en basitidir. Bilinmeyen parçacıkların karışımından çok sayıda damlacık, suyla nemlendirilmiş bir filtre kağıdının alt kenarına damlatılır. Kağıdın alt kenarı daha sonra fenol gibi su içermeyen bir çözeltiye daldırılır. Çözücü kılcal hareketle yükseldikçe, karışımdaki çözücüye sudan daha fazla afiniteye sahip olan çözünenler, filtre kağıdı üzerinde çözücü ile birlikte yukarı doğru hareket eder. Buna karşılık, filtre kağıdında neme karşı daha büyük bir afiniteye sahip olan çözünenler o kadar uzağa gidemez; Bunun yerine akan çözücüden çok hızlı hareket eder ve filtre kağıdı üzerindeki durgun su tabakasına bağlanır. Suya kıyasla bir çözücüye orta derecede afiniteye sahip olan maddeler, orta mesafeler kat edebilir. Belli bir süre sonra orijinal karışımdaki farklı çözünen maddeler filtre kağıdının farklı yerlerinde bulundu. Genellikle ikinci bir çözücü daha fazla ayırma için kullanılır ve çözücülerin farklı yönlerde hareket ettirilmesiyle gerçekleştirilir. Bu teknik, bu şekilde olduğunda, çift eksenli kromatografi olarak adlandırılır.
elektroforez
Maddeleri ayırmak için yaygın olarak kullanılan diğer bir yöntem de “elektroforez”dir. Bir eksen boyunca kromatografik ayırmadan sonra, diğer eksen boyunca bir elektrik alanı üretilir; Farklı iyonik güç ve polariteye sahip moleküller, farklı hızlarda bir uçtan diğerine hareket eder.
kolon kromatografisi
Kolon kromatografisi, basit kağıt kromatografisi gibi çalışır, ancak kağıt yerine, nişasta ve silika gibi bazı sulu adsorbanlar ile doldurulmuş bir cam kolon kullanılır. Test edilecek karışım, kolonun tepesinden susuz bir solvente damlatılır ve filtreye (veya bir pompa ile dibe) bırakılır. Akan çözücüler ve emiciler. Yani, çözücüye afinitesi daha yüksek olan maddeler doğrudan içeri akarken, moleküllere afinitesi yüksek olanlar geride kalacaktır.
Tüm malzemeleri hareket ettirmek için kolondan yeterli solvent döküldüğünde, her biri farklı zamanlarda kolonun altından çıkar ve her biri daha fazla analiz için ayrı kaplarda toplanır.
kaynak:
https://www.britannica.com
yazar: Bakan Tanner
Diğer gönderilerimize göz at
[wpcin-random-posts]