Saç renginden vücuttaki hücrelerin özelliklerine kadar pek çok biyolojik özellik genler tarafından belirlenir. Genler etkilerini nasıl gösterir? Dizi tamamlayıcı RNA molekülleri, genlerdeki DNA dizisinden sentezlenir. Bu RNA molekülleri hücrede ribozom adı verilen bir organele gider. Burada, protein bir RNA molekülünden sentezlenir. Proteinlerin genlerden sentezlendiği bu sürece gen ekspresyonu denir. Bu protein yapısal protein kategorisinde ise hücre yapısında yer alıyor demektir. Fonksiyonel bir protein olacaksa enzim veya hormon görevi görür. Böylece genler, kodladıkları RNA’lar ve proteinler aracılığıyla vücudun yapısını ve metabolizmasını şekillendirirler.
Gen ifadesi, hem çok hücreli hem de tek hücreli organizmalarda canlı hücrelerin işlevini düzenler. Bir gen mutasyonu meydana geldiğinde, protein normal olarak sentezlenemez. Bir protein artık işlevini yerine getiremez hale geldiğinde genetik hastalıklar ortaya çıkar. Bu nedenle, gen ekspresyonunun tespiti hastalık teşhisi için önemlidir. Gen ekspresyonunu ölçmek için çeşitli teknikler mevcuttur. Bu yöntemlerden bazıları eski, bazıları ise yeni ve karmaşıktır. Günümüzde biyomedikal alanda gen ekspresyonunu ölçmek ve hastalık alt tiplerini tespit etmek gibi birçok amaç için kullanılmaktadır.
İçindekiler
Gen ifadesi ile ilgili teknolojiler
Jin Habercisi
Genin iki işlevsel kısmı vardır. Bunlardan biri, protein yapma talimatlarını taşıyan şifrelenmiş DNA dizisidir. Diğer fonksiyonel kısım ise promotör olarak adlandırılır. Promotör, kodlama kısmına bağlanır ve gen ekspresyonunu aktive eder veya baskılar.
haberci gen yöntemi. Bir genin RNA ve protein üretip üretmediğini test etmek için kullanılır. Bu nedenle, promotör dizisinin aşağı akış tarafına; Lusiferaz, beta-galaktosidaz veya beta-glukuronosidaz raportör genleri eklendi. Protein bu sorumlu genlerden üretiliyorsa, üretilen protein hücrede floresan olacaktır. Bir floresan mikroskobundan radyasyon varlığının saptanması, bir genin ifade edildiğini gösterir.
Kuzey leke yöntemi
Bir RNA karışımından belirli bir RNA molekülünü tespit etmek için kullanılır. Belirli bir doku veya hücreden izole edilen bir RNA örneğini analiz etmek ve belirli bir genin RNA ifadesini ölçmek için kullanılır.
Bu tekniğin ilk adımında, RNA moleküllerinin katlanmamış ve tek sarmallı bir durumda olmasını sağlamak için numune ısıtılır. Bir sonraki adımda jel elektroforezi adı verilen bir yöntemle RNA molekülleri boyutlarına göre ayrılır. Ayrıldıktan sonra, RNA jelden zara aktarılır. Aktarım tamamlandığında, jeldeki tüm RNA zara aktarılır. Zara, istenen RNA molekülünün dizisine bağlanabilen kısa bir RNA veya DNA molekülü uygulanır. Ayrıca bu küçük molekül, bir radyoaktif atom veya bir flüoresan boya ile işaretlenmiştir. Bu molekül, ilgili RNA’ya bağlandıktan sonra, algılanan radyasyon, zarda RNA molekülünün varlığını saptar.
Western blot yöntemi
Northern Blot yöntemine benzer bir yöntemdir ancak bu yöntem RNA yerine spesifik bir proteini saptamak için kullanılır. Belirli bir protein türü, bir hücreden izole edilen bir protein karışımında saptanabilir. Bunun için proteinler jel ortamında boyutlarına göre ayrıştırılır. Jeldeki proteinler zara aktarılır. Membran, floresan etiketli antikorlarla ön işleme tabi tutulur ve antikorlar, istenen proteine bağlanır.
Gerçek zamanlı PCR
Northern Blot gibi bu yöntem, bir RNA karışımından belirli bir RNA’nın saptanmasına izin verir. Ancak bu yöntemin adımları farklıdır. Numunelerdeki RNA dizilerine tamamlayıcı (cDNA) sentezlenir. İstenen RNA dizisine tamamlayıcı olan küçük DNA dizileri (primerler) bir karışıma eklenir.[كدنا]Floresan olarak gösterilir. Flüoresan radyasyonu, primerler ile aranan RNA’ya karşılık gelen (cDNA) amplifikasyonu sırasında ölçülür. Böylece çalışılan genin ifadesinin saptanmasının yanı sıra ifade miktarı da hesaplanabilmektedir. Ayrıca birden fazla genin ekspresyonu belirlenebilir ve miktarları karşılaştırılabilir.
RNA dizilimi
RNA dizileme yöntemi ile numunedeki tüm RNA’lar dizileme ile tanımlanabilir. Bunun için örneklerdeki tüm RNA’lar dönüştürülür.[كدنا]ve parçalanmış[كدنا]. Yeni nesil DNA dizileme teknolojisi kullanılarak (bununla ilgili daha fazla bilgi için: Tüm fragmanlar dizilenir. Fragmanlar referans dizilere göre birleştirilir. Bu sayede numunedeki RNA düzeyinde gen ekspresyon profilleri belirlenir.
kaynak:
https://www.news-medical.net/life-sciences/Gene-Expression-Techniques.aspx
yazar: Ayka Olkay
Diğer gönderilerimize göz at
[wpcin-random-posts]